一種滴液式自動生物染色儀器的制造方法

文檔序號:8456136
一種滴液式自動生物染色儀器的制造方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種生物染色儀器,尤其是涉及一種滴液式自動生物染色儀器。
【背景技術】
[0002]染色是了解細菌和細胞形態的手段,革蘭、抗酸和血細胞染色是最主要和廣泛使用的方法,目前主要為人工操作,分別將革蘭染色和抗酸染色法簡述如下:
[0003]革蘭染色法是1884年由丹麥醫師Gram創立。細菌先經堿性染料結晶染色,再經碘液媒染后,用酒精脫色,在一定條件下有的細菌紫色不被脫去,有的可被脫去,因此可把細菌分為兩大類,前者叫做革蘭氏陽性菌(G+),后者為革蘭氏陰性菌(G-)。為觀察方便,脫色后再用一種紅色染料如堿性蕃紅等進行復染。陽性菌仍帶紫色,陰性菌則被染上紅色。有芽孢的桿菌和絕大多數球菌,以及所有的防線菌和真菌都呈革蘭氏正反應;弧菌、螺旋體和大多數致病性的無芽孢桿菌都呈現負反應。
[0004]革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌在化學組成和生理性質上有很多差別,染色反應不一樣?,F在一般認為革蘭氏陽性菌體內含有特殊的核蛋白質鎂鹽與多糖的復合物,它與碘和結晶紫的復合物結合很牢,不易脫色,陰性菌復合物結合程度低,吸附染料差,易脫色,這是染色反應的主要依據。另外,陽性菌菌體等電點較陰性菌為低,在相同PH條件下進行染色,陽性菌吸附堿性染料很多,因此不易脫去,陰性菌則相反。所以染色時的條件要嚴格控制。例如,在強堿的條件下進行染色,兩類菌吸附堿性染料都多,都可呈正反應;PH很低時,則可都呈負反應。此外,兩類菌的細胞壁等對結晶紫-碘復合物的通透性也不一致,陽性菌透性小,故不易被脫色,陰性菌透性大,易脫色。所以脫色時間。脫色方法也應嚴格控制。
[0005]革蘭氏染色原理如下:
[0006]G+菌:細胞壁厚,肽聚糖網狀分子形成一種透性障,當乙醇脫色時,肽聚糖脫水而孔障縮小,故保留結晶紫-碘復合物在細胞膜上。呈紫色。
[0007]G-菌:肽聚糖層薄,交聯松散,乙醇脫色不能使其結構收縮,其脂含量高,乙醇將脂溶解,縫隙加大,結晶紫-碘復合物溶出細胞壁,沙黃復染后呈紅色。
[0008]革蘭氏染色法一般包括初染、媒染、脫色、復染等四個步驟,具體操作方法是:(I)涂片固定,(2)草酸銨結晶紫染I分鐘,(3)自來水沖洗,(4)加碘液覆蓋涂面染I分鐘,(5)水洗,用吸水紙吸去水分,(6)加95%酒精數滴,并輕輕搖動進行脫色,30秒后水洗,吸去水分,(7)蕃紅染色液(稀)(或沙黃)染10秒鐘后,自來水沖洗,(8)干燥,鏡檢。
[0009]染色的結果,革蘭陽性菌染呈紫色,革蘭陰性菌染呈紅。
[0010]以上是常規人工的革蘭染色為四步染色和四次水洗,其操作比較復雜、浪費水和時間長?,F代實驗室工作繁忙和成本高,對各項技術方法有力求簡便和節約的要求,以便在有限的時間和成本內完成更多的任務。
[0011]抗酸染色法是1882年由埃利希(F.Ehrlich)首創并經F.齊爾(Ziehl)改進而創造出的細菌染色法。其中最具代表性的為對結核菌的齊爾-尼爾森(Ziehl—Neelsen)染色法和齊爾-加貝特(Ziehl—Gabbet)染色法。用石炭酸復紅染色后,用鹽酸乙醇脫色,再用美藍進行對比染色。
[0012]抗酸染色的原理如下:
[0013]分枝桿菌,含結核菌的細胞壁內含有大量的脂質,包圍在肽聚糖的外面,所以分枝桿菌一般不易著色,要經過加熱和延長染色時間來促使其著色。但分枝桿菌中的分枝菌酸與染料結合后,就很難被酸性脫色劑脫色,故名抗酸染色。
[0014]齊-尼氏抗酸染色法是在加熱條件下使分枝菌酸與石炭酸復紅牢固結合成復合物,用鹽酸酒精處理也不脫色。當再加堿性美蘭復染后,分枝桿菌仍然為紅色,而其他細菌及背景中的物質為藍色。
[0015]抗酸染色一般步驟如下:
[0016]I)初染:用玻片夾夾持涂片標本,滴加石炭酸復紅2-3滴,在火焰高處徐徐加熱,切勿沸騰,出現蒸汽即暫時離開,若染液蒸發減少,應再加染液,以免干涸,加熱5分鐘,待標本冷卻后用水沖洗。
[0017]2)脫色:3%鹽酸酒精脫色3分鐘;用水沖洗。
[0018]3)復染:用堿性美蘭溶液復染30秒,水洗,用吸水紙吸干后用油鏡觀察。
[0019]以上是常規的人工抗酸染色為三步染色和三次水洗,其操作比較復雜、浪費水和時間長?,F代實驗室工作繁忙和成本高,對各項技術方法有力求簡便和節約的要求,以便在有限的時間和成本內完成更多的任務。
[0020]中國專利CN102220236A公布了一種革蘭染色二步法自動染色儀,該染色儀由染色池、清洗池、暖氣流干燥池、機械手、軌道及顯示屏組成,染色池有兩個,第一染色池、第二染色池、清洗池及暖氣流干燥池依次排列設置在染色儀的前部,機械手設在染色儀的上部,該機械手的前端內可放置待染片或質控片,機械手的后端與所述的軌道連接,顯示屏設在染色儀頂部的一側。該發明生產工藝及操作流程簡單,對水質無特殊要求,生產及檢驗過程中無有毒、有害物質投入和產生,提供更快速、易標準化的實驗結果,結果易于觀察和判斷,安全可靠。但是由于該染色儀采用的是放入染色池中浸染的方式,導致染色效果不好。

【發明內容】

[0021]本發明的目的就是為了克服上述現有技術存在的缺陷而提供一種操作簡便、方法可靠、性能穩定、可滿足多種染色方式的滴液式自動生物染色儀器。
[0022]本發明的目的可以通過以下技術方案來實現:
[0023]一種滴液式自動生物染色儀器,包括機架、豎向軌道、玻片盒、橫向軌道、機械手、滴液式染色與清洗裝置、烘干器、廢液杯及控制模塊,所述的機架的頂端設有一裝載口,所述的豎向軌道從裝載口向下伸到機架內部,所述的玻片盒設在裝載口處,并可沿豎向軌道上下升降,玻片盒內裝有細菌或細胞染色用玻片,所述的橫向軌道橫向設在機架的內部,所述的機械手的后端滑動連接在橫向軌道上,機械手的前端用于夾持玻片盒內的玻片,所述的滴液式染色與清洗裝置設在機架的頂端,所述的烘干器設在機架內部,所述的廢液杯設在機架的底端,用于盛裝染液廢液與清洗廢液,所述的控制模塊設在機架的側面上,并與機械手、滴液式染色與清洗裝置及烘干器電連接;
[0024]玻片盒沿豎向軌道下降,機械手從玻片盒內夾持出玻片,并在橫向軌道上橫向移動,通過滴液式染色與清洗裝置的下方,滴液式染色與清洗裝置對玻片進行染色與清洗,然后機械手將玻片送回玻片盒,取下一個玻片繼續同樣動作,所有玻片染色完成后,烘干器對玻片盒內的玻片進行烘干,干燥后進行鏡檢。
[0025]所述的滴液式染色與清洗裝置包括蠕動泵與試劑瓶架,所述的蠕動泵設有若干個,布設在機架的頂端,所述的試劑瓶架設在機架的底端,用于放置初染劑儲瓶、復染劑儲瓶與清洗液儲瓶,蠕動泵上的輸液管一端伸入到初染劑儲瓶、復染劑儲瓶或清洗液儲瓶中,另一端射入到機架內部,通過滴液的方式對玻片染色與清洗;所述的初染劑儲瓶內設有初染劑,所述的復染劑儲瓶內設有復染劑,所述的清洗液儲瓶內設有清洗液。
[0026]所述的蠕動泵至少設有3個,分別用于輸送初染劑、復染劑及清洗液。
[0027]所述的蠕動泵可設有多個,任意角度均可向玻片雙側垂直噴射染液或清洗液。
[0028]所述的廢液杯抽插式連接在機架的底端,可脫離機架。
[0029]所述的機械手可水平或豎向移動或轉動。
[0030]所述的控制模塊包括控制電路板及與控制電路板連接的操作界面。
[0031]所述的玻片盒內設有玻片I?30片。
[0032]所述的玻片盒內設有玻片5片、10片或20片。
[0033]所述的烘干器的烘干溫度設在40?60°C。
[0034]使用本發明的儀器進行染色時,玻片上的待檢材料可選為培養的菌、血、痰、便或分泌物等。
[0035]本發明的滴液式自動生物染色儀器可任選抗酸或熒光TB或革蘭染色。
[0036]使用本發明的儀器進行抗酸染色時,首先一步滴加l_3ml的初染劑(含2.0%堿性復紅的溶液)覆蓋標本,染色2-3分鐘,水洗,再滴加3.0 %鹽酸酒精,脫色30秒,水洗,復染劑(0.8%的美蘭溶液)l-3ml覆蓋標本,染色20-30秒,水洗,干后鏡檢。在涂片中可見到,染成紅色的為抗酸陽性菌和染成蘭色的為抗酸陰性菌,對比鮮明。
[0037]使用本發明的儀器進行革蘭染色時,先滴加l_3ml的初染劑(含0.5%結晶紫溶液)覆蓋標本,染色30秒,水洗,再滴加l-3ml媒染脫色劑(I %的碘和酒精丙酮溶液)覆蓋標本,10秒,水洗,最后滴加0.6%的堿性復紅溶液,復染10秒,水洗,干后鏡檢。在涂片中可見到,染成的紫色為革蘭陽性菌和染成紅色的為革蘭陰性菌,對比鮮明。
[0038]使用本發明的儀器進行熒光TB染色時,先滴加l_3ml的初染劑(含0.75%吖啶醇溶液)覆蓋標本,染色15分鐘,水洗;再滴加脫色劑(3%的鹽酸酒精溶液)l-3ml覆蓋標本,脫色30秒,水洗;最后復染滴加l_3ml復染劑(0.5%的高錳酸鉀溶液)脫色30秒,水洗,干后鏡檢。在涂片中可見到,染成的明亮橘黃色為TB陽性和背景無色,對比鮮明。
[0039]使用本發明的儀器進行血細胞染色時,先滴加l_3ml的
再多了解一些
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